Práctica Hemoglobina

 Práctica nº 13 Hemoglobina

REFRACTOMETRÍA HEMOGLOBINA:

Principio del método: La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada. Preparación:

Reactivo de trabajo (RT):

- Para 5 mL 4,9 mL agua destilada + 2 gotas de Reactivo Ferricianuro de potasio

Material:

- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm.

- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.

- Equipamiento habitual de laboratorio.

Muestras:
- Sangre capilar venosa.        

Procedimiento:

1. Condiciones de ensayo:

• Longitud de onda 540nm
• Cubeta 1cm con paso de luz
• Tª 15-25ºC

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada, blanco.

3. Pipetear.

4. Mezclar e incubar 3 minutos a Tª ambiente

5. Leer la absorbancia del calibrador y la muestra frente al blanco del reactivo.

Cálculos con patrón:

(A) Muestra x 15 (concentración patrón)= g/dl de hemoglobina en la muestra.

(A) Patrón

Valores de referencia: ♀12-16 g/dl ♂14-18 g/dl








            Blanco                                        Patrón                   Muestra capilar